如何识别CRISPR ／ CAS9点突变小鼠，转基因的小鼠

　　每个星期二都会更新一系列“老鼠大鼠”，以回答在饲养小鼠过程中经常遇到的繁殖和评估问题。评估的混乱可能会被扔到小型比赛中，而小型比赛将为您提供以下内容的详细答案。

　　基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原理是使用基因工程小鼠基因组和野生小鼠基因组之间的序列差异，使用小鼠基因组DNA作为执行PCR的模板，并使用凝胶电泳比较不同的基因组特异性产物。根据大小，大小不同于小鼠的不同基因型。在最后一期中，我们谈到了CRISPR/CAS9基因的识别。今天，我们将学习CRISPR/CAS9突变体，转基因小鼠以及ES靶向技术来识别鼠标。

　　1.如何在CRISPR/CAS 9分中识别小鼠？

　　由于单个 - 阿尔科利或少数群体的增加，删除或替换，无法区分电饰图上的突变片段和野生条带的大小。因此，只能鉴定出PCR，并且有必要结合测序或酶切割。

　　1.底漆设计

　　当您选择点上游和下游片段的上游和下游片段时，当底漆的设计时，您还必须考虑突变后是否存在酶切割点，以便酶两侧的片段切点是区分的。首先要端口PCR扩增，然后切割或序列化放大产物电气。如果突变点之后的序列正是某种酶特殊识别的位点，则还可以使用酶实验进行验证。切。如果未引入酶切割点，则只能对PCR产物进行序列，然后分析目标的基础是否通过峰值图突变。

　　2.预期的片段尺寸和电泳结果

　　使用F/R扩增，条带1的尺寸是野生和正带，切割胶水回收和测试。

　　2.如何识别转基因的大鼠？

　　由于技术的局限性，转基因的鼠标存在副本和不确定插入站点的副本的问题，并且只能判断阳性。通常，如果同时识别出上述3对底漆，则通常认为它们为正。在繁殖过程中，建议不同的线F0和WT分开传输它们，然后通过验证表达体积来筛选最佳传递线。

　　如何识别ES建造的大鼠？

　　评估方法与ES技术的CRISPR/CAS9的设计原理相似。 ES技术使用NEO筛查。竞争的TurboKnockOut技术可以获得自dreating分量的F1代老鼠，也无需验证NEO。

　　报告/反馈